ATP 含量測試盒的測定原理

（100 管/48 樣）

一、檢測意義：

三磷酸腺苷（adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生物體內能量轉換最基本的載體, 其含量的變化直接關系到各器官的能量代謝。ATP 作為最重要的能量分子在細胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP 水平的改變，會影響許多細胞的功能。通常細胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下，ATP 水平會下降，而高葡萄糖刺激等對于一些細胞可以上調細胞內 ATP 水平。通常ATP 水平的下降表明線粒體的功能受損或下降，在細胞凋亡時 ATP 水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時發(fā)生狀態(tài)。ATP 含量測定試劑盒可以用于檢測紅細胞或組織內的 ATP 水平。

二、測定原理：

肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，用磷鉬酸比色法進行檢測。

三、試劑組成及配制：（100 管/48 樣）（本試劑盒附送雙蒸水一瓶，供客戶配試劑時使用）

[注]：本試劑盒中 ATP3# 粉劑-20℃冷凍保存，其余試劑 4℃保存，有效期 3 個月，開封后有效期為 1 個月。

四、樣本前處理：

1、紅細胞：抗凝全血取下層壓積紅細胞，一般按 1：4 的體積比加雙蒸水進行稀釋，再混勻使溶血，制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮 10分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，4000 轉/分鐘離心 10 分鐘，取上清液待測。

2、組織樣本：準確稱取組織重，按重量（g）：體積（ml）=1：9 的比例，加入 9 倍體積的冷雙蒸水，冰水浴勻漿, 制成 10%的勻漿液(取出部分 3500 轉/分離心 10 分鐘,取上清測定蛋白濃度)，再置于沸水浴中煮 10 分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，3500 轉/分離心 10 分鐘，取上清液待

測。

3、培養(yǎng)細胞：先離心處理將細胞與培養(yǎng)上清分離，除去培養(yǎng)上清，得到下層沉淀細胞（一般細胞數量達到 106），將收集好的細胞加入 300～500μL 冷雙蒸水，置于冰水浴中勻漿破碎(取出部分測定蛋白濃度)，后將細胞懸液于沸水浴中加熱 10 分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，即可用于測定。[注]：混勻抽提 1 分鐘即為漩渦混勻 1 分鐘。

五、操作步驟：

ATP 含量測試盒的測定原理