細胞增殖與示蹤檢測試劑盒新品上市，信帆生物供應細胞增殖與示蹤檢測試劑盒，產品質量穩(wěn)定。

細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

產品描述

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 是基于CFDA, SE對細胞進行示蹤及增殖檢測的試劑盒，由CFDA,SE粉末、溶劑及相關細胞染色緩沖液組成，該試劑盒主要工作原理為：CFDA, SE具有細胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，可被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可發(fā)強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯到細胞蛋白質上，同時過量且未被偶聯的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養(yǎng)基內，被后續(xù)清洗步驟所清除。經CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標記的時間可達數月，因此非常適用于細胞群落分析。

CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1通道）根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的熒光強度），以及更多分裂次數的細胞。CFSA，SE可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。

CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光，Ex=494 nm，Em=521 nm，除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。

本品為CFDA，SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒，包含配制CFDA，SE儲存液所需的溶劑和細胞標記用的染色緩沖液，簡化了實驗前期準備工作。另，CFDA,SE標記細胞一般15 min即可完成，對于不同細胞，需要自行摸索佳標記時間。按照每個樣本的標記體積為2 mL計算。對應貨號40714ES76和40714ES80的試劑盒可分別進行500次和1000次檢測。

產品組分

運輸與保存

冰袋運輸。-20℃干燥避光保存，有效期1年。

注意事項

1）CFDA,SE易被水解，在水溶液中會很快變質。因此保存過程中粉末或者儲存液都需干燥保存；而且使用過程中避免接觸水。但在標記細胞的過程中和水接觸是在許可范圍內的。

2）CFDA,SE溶劑在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，于20-25℃水浴溫育片刻至全部溶解后方可使用。

3）不同的細胞其細胞內酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。

4）雖然本試劑盒已對CFDA,SE染色體系做了優(yōu)化處理，但建議使用者根據自身的細胞類型，培養(yǎng)條件以及應用的不同來梯度摸索佳的工作濃度，以低濃度得到適宜的標記效率為準。

5）熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

6）為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。

操作方法

1.  CFDA,SE儲存液（1000×）的配制

加入500 µL CFDA,SE溶劑到1管CFDA,SE熒光探針中進行溶解，充分混勻即得到1000×的儲存液。

注意：該儲存液好在1個月內使用完畢，長不超過2個月。剩余儲存液請務必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復凍融，-70℃避光保存可適當延長保存周期。

2.  2×CFDA,SE工作液的配制

取適當體積的細胞染色緩沖液（5×），用無菌的去離子水進行5倍稀釋，配制成1×細胞染色緩沖液，并利用該緩沖液對上述CFDA,SE（1000×）儲存液進行500×稀釋，如取2 μL CFSE儲存液加入到1 mL 1×細胞染色緩沖液中，混勻后即可得到2×CFDA,SE染色工作液?！咀⒁狻浚弘m然本試劑盒已對CFDA,SE染色體系做了優(yōu)化處理，但建議使用者根據自身的細胞類型，培養(yǎng)條件以及應用的不同來梯度摸索佳的工作濃度，以低工作濃度得到適宜的標記效率為準。

1.操作步驟

1）離心收集細胞，利用1 mL 1×細胞染色緩沖液懸浮細胞于15 mL離心管，并調整細胞濃度為1-5×106個/mL；

2）把1 mL CFDA,SE工作液(2×)加入到上述15 mL離心管內，輕輕混勻。

3）37℃孵育10 min。
注意：對于不同細胞，需要自行摸索佳標記時間。

4）立即在15 mL離心管內加入約10 mL*細胞培養(yǎng)液(含10% FBS)，室溫顛倒數下混勻，以終止標記反應。

5）室溫離心去上清，再用5-10 mL*細胞培養(yǎng)液洗滌一次。

6）再加入5-10 mL*細胞培養(yǎng)液，37℃孵育10 min，以促進CFSE【酯酶催化CFDA,SE得到的熒光產物】在細胞內的駐留及未反應的CFDA,SE進入*細胞培養(yǎng)液。離心去上清，完成后一次洗滌。

7）此時標記好的細胞已可進行后續(xù)的體外增殖檢測或者特定目的的細胞示蹤。按照正常方法培養(yǎng)細胞，然后在合適的時間點用熒光顯微鏡或流式細胞儀【FL1通道】進行結果分析，呈綠色熒光。標記的細胞也可用于活體動物的移植，并用熒光進行示蹤。

注意：若需要對細胞進行固定，請用醛類固定劑如3.7%多聚甲醛于室溫固定15 min；之后若還需要進行其他如抗體標記，請用冰丙酮透化處理細胞10 min。

細胞增殖與示蹤檢測試劑盒新品上市