介紹酶抑制分光光度法

　　一、有機(jī)磷農(nóng)-藥和氨基甲酸酯農(nóng)-藥的作用機(jī)理

有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)-藥能抑制昆蟲(chóng)神經(jīng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲(chóng)中毒致死。如果有有機(jī)磷農(nóng)-藥存在，有機(jī)磷農(nóng)-藥就與膽堿酯梅結(jié)合，膽堿酯酶就不能分解乙酰膽堿為乙酸和膽堿，造成乙酰膽堿在神經(jīng)肌接頭和體內(nèi)其它部位的過(guò)量積聚，引起一系列神經(jīng)中毒癥狀。

　　二、乙酰膽堿酯酶抑制法（酶法）的作用原理

從生物化學(xué)的角度看，有機(jī)磷農(nóng)-藥和氨基甲酸酯農(nóng)-藥與乙酰膽堿是競(jìng)爭(zhēng)性作用于膽堿酯酶的，即膽堿酯酶可以與乙酰膽堿結(jié)合，催化乙酰膽堿生成乙酰和膽堿，另一方面，如果膽堿酯酶與有機(jī)磷農(nóng)-藥結(jié)合，就阻斷了反應(yīng)的進(jìn)行。根據(jù)這個(gè)原理，就可以利用膽堿酯酶的催化反應(yīng)的抑制法，設(shè)計(jì)一種通過(guò)顏色變化的直觀的檢測(cè)方法，來(lái)快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)-藥和氨基甲酸酯農(nóng)-藥的殘留情況。因此，生物化學(xué)法（酶法）就是利用某種酶受影響的程度來(lái)反映農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)-藥殘留量。

　　三、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）方法原理

乙酰膽堿酯酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)-藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解，從而無(wú)顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)-藥殘留是否存在。在溶液中反應(yīng)后，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值隨時(shí)間的變化，計(jì)算出抑制率，以此判斷蔬菜中含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)-藥殘留的情況。

　　四、速測(cè)儀法的優(yōu)缺點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：在于簡(jiǎn)單方便，快捷、成本低廉。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需30分鐘左右，它可以作為傳統(tǒng)儀器分析方法的有益補(bǔ)充，針對(duì)市場(chǎng)、農(nóng)場(chǎng)蔬菜農(nóng)-藥殘留量進(jìn)行快速篩選監(jiān)測(cè)，保證上市蔬菜食用的相對(duì)安全性。

缺點(diǎn)：酶試劑易失活，導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果誤差，重復(fù)性不好，實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率大約為60%~70%左右；存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)-藥，不能檢測(cè)有機(jī)氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)-藥；不適合檢測(cè)蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品；需要對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行專門培訓(xùn)，否則將會(huì)對(duì)出現(xiàn)的問(wèn)題無(wú)法正確處理或判斷，得出錯(cuò)誤的結(jié)果。

由農(nóng)-藥殘留快速檢測(cè)儀生化檢測(cè)法開(kāi)發(fā)的速測(cè)卡法（酶抑制顯色紙片法）和速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法），前者在80年代在省級(jí)部門小范圍使用過(guò)，后被后者取代。目前我省廣泛使用農(nóng)-藥殘留檢測(cè)方法主要有兩大類—色譜檢測(cè)法和速測(cè)儀法。色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)-藥殘留執(zhí)-法提供依據(jù)，主要分布在省級(jí)相關(guān)部門，部分地州也具有一定的檢測(cè)能力。速測(cè)儀法只能作農(nóng)殘定性分析，但它具有短時(shí)間能夠檢測(cè)大量樣本、檢測(cè)成本低，對(duì)于檢測(cè)人員技術(shù)水平要求低，易于在基層推廣等特點(diǎn)，是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)-藥殘留的一種有效方法，也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用的農(nóng)-藥殘留快速檢測(cè)方法。廣泛用于蔬菜、水果生物試劑基地和批發(fā)市場(chǎng)等，主要用來(lái)防止有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)-藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)的蔬菜和水果流入市場(chǎng)。