MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒的使用方法
更新時(shí)間：2019-05-07 點(diǎn)擊次數(shù)：1479次 MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan。在特定溶劑存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。
噻唑蘭（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT），也稱作溴化噻唑藍(lán)四氮唑，是一種黃色染料，已經(jīng)普遍替代傳統(tǒng)的臺(tái)盼藍(lán)染色法或者放射性同位素插入法，用來檢測細(xì)胞的活力，細(xì)胞增殖以及細(xì)胞毒性分析。檢測原理在于：MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細(xì)胞膜滲透性?；罴?xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠催M(jìn)入的MTT還原成為水不溶性的深藍(lán)色MTT-甲臜結(jié)晶，而死細(xì)胞不具有此功能。甲臜結(jié)晶是不能穿透細(xì)胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細(xì)胞內(nèi)。甲臜結(jié)晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解出來，酶標(biāo)儀下測定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，用以評估細(xì)胞存活狀況。
保存條件：
4℃或-20℃保存，MTT需避光保存，一年有效；MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室溫保存。
注意事項(xiàng)：
1、由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
2、 MTT溶劑在低溫情況下會(huì)凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
3、 MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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