人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液

規(guī)格:200mL

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。外周血中單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度較大，為1.090 g/mL左右，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090 /mL，血小板為1.030~1.035 g/mL。為此利用一種密度介于1.075~1.092之間而近于等滲的溶液做密度梯度離心，使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。

產(chǎn)品指標(biāo):

密度

滲透壓

無(wú)菌

1.077+0.001g/ml

290~350 mOsm/kg H20

0.1um 濾膜過(guò)濾

保存條件:

本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年。無(wú)菌開封后，保存于室溫

操作步驟:

1.取新鮮抗凝全血(EDTA、枸慘酸鈉或肝素抗凝均可) 或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2.在離心管中加入適量分離液 (當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時(shí)，加入3mL分離液:大于等于3mL,加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果)，將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象。)

3.室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離 心20~30min(血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速不超過(guò)1200g)。

4.離心后將出現(xiàn)明顯的分層: 最上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為單個(gè)核細(xì)胞層，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。

5.小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。

 人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液